食用植物油衛(wèi)生標準的分析方法

食用植物油衛(wèi)生標準的分析方法

【GB/T 5009.37—1996】
　　1　主題內容與適用范圍
　　本標準規(guī)定了食用植物油衛(wèi)生指標的分析方法。
　　本標準適用于食用植物油衛(wèi)生指標的分析。
　　殘留溶劑的最低檢出量為0.1mg/kg。
　　2　引用標準
　　GB 2716　食用植物油衛(wèi)生標準
　　GB/T 5009.11　食品中總砷的測定方法
　　GB/T 5009.22　食品中黃曲霉毒素B1的測定
　　GB/T 5009.27　食品中苯并(a)芘的測定方法
　　3　感官檢查
　　3.1　色澤
　　3.1.1　儀器
　　燒杯：直徑50mm，杯高100mm。
　　3.1.2　分析步驟
　　將樣品混勻并過濾，然后倒入燒杯中，油層高度不得小于5mm，在室溫下先對著自然光觀察，然后再置于白色背景前借其反射光線觀察并按下列詞句記述：白色、灰白色、檸檬色、淡黃色、黃色、橙色、棕黃色、棕色、棕紅色、棕褐色等。
　　3.2　氣味及滋味
　　3.2.1　分析步驟
　　將樣品倒入150mL燒杯中，置于水浴上，加熱至50℃，以玻璃棒迅速攪拌。嗅其氣味，并蘸取少許樣品，辨嘗其滋味，然后按正常、焦糊、酸敗、苦辣等詞句記述。
　　4　理化檢驗
　　4.1　酸價
　　4.1.1　原理
　　植物油中的游離脂肪酸用氫氧化鉀標準溶液滴定，每克植物油消耗氫氧化鉀的毫克數(shù)，稱為酸價。
　　4.1.2　試劑
　　4.1.2.1　乙醚－乙醇混合液：按乙醚－乙醇(2＋1)混合。用氫氧化鉀溶液(3g/L)中和至酚酞指示液呈中性。
　　4.1.2.2　氫氧化鉀標準滴定溶液〔c(KOH)＝0.05mol/L〕。
　　4.1.2.3　酚酞指示液：10g/L乙醇溶液。
　　4.1.3　分析步驟
　　準確稱取3.00～5.00g樣品，置于錐形瓶中，加入50mL中性乙醚－乙醇混合液，振搖使油溶解，必要時可置熱水中，溫熱促其溶解。冷至室溫，加入酚酞指示液2～3滴，以氫氧化鉀標準滴定溶液(0.05mol/L)滴定，至初現(xiàn)微紅色，且0.5min內不褪色為終點。
　　4.1.4　計算
　　

　　式中：X1——樣品的酸價；
　　V1——樣品消耗氫氧化鉀標準滴定溶液體積，mL；
　　c1——氫氧化鉀標準滴定的實際濃度，mol/L；
　　m1——樣品質量，g；
　　56.11——與1.0mL氫氧化鉀標準滴定溶液［c(KOH)＝1.000mol/L］相當?shù)臍溲趸�鉀毫克�?shù)。
　　結果的表述：報告算術平均值的二位有效數(shù)。
　　4.1.5　允許差
　　相對相差≤10%。
　　4.2　過氧化值
　　4.2.1　原理
　　油脂氧化過程中產(chǎn)生過氧化物，與碘化鉀作用，生成游離碘，以硫代硫酸鈉溶液滴定，計算含量。
　　4.2.2　試劑
　　4.2.2.1　飽和碘化鉀溶液：稱取14g碘化鉀，加10mL水溶解，必要時微熱使其溶解，冷卻后貯于棕色瓶中。
　　4.2.2.2　三氯甲烷－冰乙酸混合液：量取40mL三氯甲烷，加60mL冰乙酸，混勻。
　　4.2.2.3　硫代硫酸鈉標準滴定溶液［c(Na2S2O3)＝0.002mol/L］。
　　4.2.2.4　淀粉指示劑(10g/L)：稱取可溶性淀粉0.5g，加少許水，調成糊狀，倒入50mL沸水中調勻，煮沸。臨用時現(xiàn)配。
　　4.2.3　分析步驟
　　稱取2.00～3.00g混勻(必要時過濾)的樣品，置于250mL碘瓶中，加30mL三氯甲烷－冰乙酸混合液，使樣品完全溶解。加入1.00mL飽和碘化鉀溶液，緊密塞好瓶蓋，并輕輕振搖0.5min，然后在暗處放置3min。取出加100mL水，搖勻，立即用硫代硫酸鈉標準滴定溶液(0.002mol/L)滴定，至淡黃色時，加1mL淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失為終點，取相同量三氯甲烷－冰乙酸溶液、碘化鉀溶液、水，按同一方法，做試劑空白試驗。
　　4.2.4　計算
　　
　　式中：X2——樣品的過氧化值，g/100g；
　　X3——樣品的過氧化值，meq/kg；
　　V2——樣品消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液體積，mL；
　　V3——試劑空白消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液體積，mL；
　　c2——硫代硫酸鈉標準滴定溶液的濃度，mol/L；
　　m2——樣品質量，g；
　　0.1269——與1.00 mL硫代硫酸鈉標準滴定溶液[c(Na2S2O3)=1.000 mol/L]相當?shù)牡獾馁|量，g；；
　　78.8——換算因子。
　　結果的表述：報告算術平均值的二位有效數(shù)。
　　4.2.5　允許差
　　相對相差≤10%。
　　4.3　羰基價
　　4.3.1　原理
　　羰基化合物和2，4－二硝基苯肼的反應產(chǎn)物，在堿性溶液中形成褐紅色或酒紅色，在440nm下，測定吸光度，計算羰基價。
　　4.3.2　試劑
　　4.3.2.1　精制乙醇：取1000mL無水乙醇，置于2000mL圓底燒瓶中，加入5g鋁粉、10g氫氧化鉀，接好標準磨口的回流冷凝管，水浴中加熱回流1h，然后用全玻璃蒸餾裝置，蒸餾收集餾液。
　　4.3.2.2　精制苯：取500mL苯，置于1000mL分液漏斗中，加入50mL硫酸，小心振搖5min，開始振搖時注意放氣。靜置分層，棄除硫酸層，再加50mL硫酸重復處理一次，將苯層移入另一分液漏斗，用水洗滌三次，然后經(jīng)無水硫酸鈉脫水，用全玻璃蒸餾裝置蒸餾收集餾液。
　　4.3.2.3　2，4－二硝基苯肼溶液：稱取50mg2，4－二硝基苯肼，溶于100mL精制苯中。
　　4.3.2.4　三氯乙酸溶液：稱取4.3g固體三氯乙酸，加100mL精制苯溶解。
　　4.3.2.5　氫氧化鉀－乙醇溶液：稱取4g氫氧化鉀，加100mL精制乙醇使其溶解，置冷暗處過夜，取上部澄清液使用。溶液變黃褐色則應重新配制。
　　4.3.2.6　三苯膦溶液(0.5g/L)：稱取100mg的三苯膦用苯溶解后轉入200mL容量瓶中并定容至刻度。
　　4.3.3　儀器
　　分光光度計
　　4.3.4　分析步驟
　　稱取約0.025～0.10g樣品，置于25mL具塞試管中，加入5mL三苯膦溶液(0.5g/L)(三苯膦還原氫過氧化物為非羰基化合物)溶解樣品，室溫暗處放置30min，再加3mL三氯乙酸溶液及5mL2，4－二硝基苯肼溶液，仔細振搖混勻，在60℃水浴中加熱30min，冷卻后，沿試管壁慢慢加入10mL氫氧化鉀－乙醇溶液，使成為二液層，塞好，劇烈振搖混勻，放置10min。以1cm比色杯，用不含三苯膦的試劑空白調節(jié)零點，含三苯膦還原劑的試劑空白吸收作校正于波長440nm處測吸光度。
　　4.3.5　計算
　　
　　式中：X4——樣品的羰基價，mmol/kg；
　　A1——測定時樣液吸光度；
　　m2——樣品質量，g；
　　V4——測定用樣品液的體積，mL；
　　854——各種醛的毫摩爾數(shù)的平均值。
　　結果的表述：報告算術平均值的三位有效數(shù)。
　　4.3.6　允許差
　　相對相差≤5%。
　　4.4　游離棉酚(本法適用于棉籽油)。
　　4.4.1　紫外分光光度法
　　4.4.1.1　原理
　　樣品中游離棉酚經(jīng)用丙酮提取后，在378nm有最大吸收，其吸收值與棉酚量在一定范圍內成正比，與標準系列比較定量。
　　4.4.1.2　儀器。
　　紫外分光光計。
　　4.4.1.3　試劑
　　4.4.1.3.1　丙酮(70%)：將350mL丙酮加水稀釋至500mL。
　　4.4.1.3.2　棉酚標準溶液：準確稱取0.1g棉酚，置于100mL容量瓶中，加丙酮(70%)溶解并稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于1mg棉酚。
　　4.4.1.3.3　棉酚標準使用液：吸取棉酚標準溶液5.0mL，置于100mL容量瓶中，加丙酮(70%)稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于50.0μg棉酚。
　　4.4.1.4　分析步驟
　　稱取1.00g精制棉油或0.20g粗棉油，置于100mL具塞錐形瓶中，加入20.0mL丙酮(70%)，并加入玻璃珠3～5粒，在電動振蕩器上振蕩30min，然后在冰箱中放置過夜。取此提取液之上清液，過濾。
　　吸取0，0.1，0.2，0.4，0.8，1.6，2.4mL棉酚標準使用液(相當于0，5，10，20，40，80，120μg棉酚)，分別置于10mL具塞試管中。各加入丙酮(70%)至10mL，混勻，靜置10min。取濾液及標準液于1cm石英比色杯中，以丙酮(70%)調節(jié)零點于378nm波長處，測吸光度，繪制標準曲線比較。
　　4.4.1.5　計算
　　
　　式中：X5——樣品中游離棉酚的含量，g/100g；
　　m3——測定用樣液中游離棉酚的質量，μg；
　　m4——樣品質量，g。
　　結果的表述：報告算術平均值的三位有效數(shù)。
　　4.4.1.6　允許差
　　相對相差≤10%。
　　4.4.2　苯胺法
　　4.4.2.1　原理
　　樣品中游離棉酚經(jīng)提取后，在乙醇溶液中與苯胺形成黃色化合物，與標準系列比較定量。
　　4.4.2.2　試劑
　　4.4.2.2.1　丙酮(70%)：量取70mL丙酮，加水至100mL。
　　4.4.2.2.2　乙醇(95%)。
　　4.4.2.2.3　苯胺：應為無色或淡黃；若色深則重蒸餾。
　　4.4.2.2.4　棉酚標準溶液：同4.4.1.3.2和4.4.1.3.3。
　　4.4.2.3　分析步驟
　　稱取約1.00g樣品，置于150mL具塞錐形瓶中，加入20.0mL丙酮(70%)，加入玻璃珠3～5粒，劇烈振搖1h，在冰箱中過夜，過濾，濾液備用。
　　在兩支25mL具塞比色管中，各加入2.0mL上述濾液。以甲管為樣品管，乙管為對照管。另吸取0，0.10，0.20，0.40，0.80，1.00mL棉酚標準使用液(相當0，5，10，20，40，50μg棉酚)各兩份，分別置于甲、乙兩組25mL具塞比色管中，各管均加入丙酮(70%)至2mL，甲組標準管與樣品管甲管各加入3mL苯胺，在80℃水浴中加熱15min，取出冷至室溫，各加入乙醇至25mL；乙組標準管與樣品管乙管各加乙醇至25mL。兩組溶液在加乙醇后均放置15min，以甲組標準的零管為試劑空白，以乙組的零管為溶劑空白，用1cm比色杯，以各組標準零管調節(jié)零點，在波長445nm處，測定兩組的吸光度，以兩組對應的吸光度之差，以及相應標準濃度繪制標準曲線，以樣品管甲管與乙管的吸光度之差從標準曲線查出棉酚含量。
　　4.4.2.4　計算
　　
　　式中：X6——樣品中游離棉酚的含量，g/100g；
　　m5——測定用樣液中游離棉酚的質量，μg；
　　m6——樣品質量，g。
　　結果的表述：同4.4.1.5。
　　4.4.2.5　允許差
　　同4.4.1.6。
　　4.5　砷
　　按GB/T 5009.11操作。
　　4.6　黃曲霉毒素B1
　　按GB/T 5009.22操作。
　　4.7　苯并(a)芘
　　按GB/T 5009.27操作。
　　4.8　殘留溶劑
　　4.8.1　原理
　　將植物油樣品放入密封的平衡瓶中，在一定溫度下，使殘留溶劑氣化達到平衡時，取液上氣體注入氣相色譜中測定，與標準曲線比較定量。
　　4.8.2　試劑
　　4.8.2.1　N－N－二甲基乙酰胺(簡稱DMA)：吸取1mL放入100～150mL頂空瓶中，在50℃放置0.5h，取液上氣0.1mL注入氣相色譜儀在0～4min內無干擾即可使用。如有干擾可用超聲波處理30min或通入氮氣用曝氣法蒸去干擾。
　　4.8.2.2　六號溶劑標準溶液：稱取洗凈干燥的具塞20～25mL氣化瓶的質量為A，瓶中放入比氣化瓶體積少1mL的DMA密塞后稱量為B，用1mL的注射器取約0.5mL六號溶劑標準通過塞注入瓶中(不要與溶液接觸)，混勻，準確稱量為C。用下式計算六號溶劑油的濃度：
　　
　　式中：X7——六號溶劑的濃度，mg/mL。
　　m7——瓶和塞的質量，g；
　　m6——瓶、塞和DMA的質量，g；
　　m5——B加六號溶劑的質量，g；
　　0.935——DMA在20℃時密度，g/mL。
　　4.8.3　儀器
　　4.8.3.1　氣化瓶(頂空瓶)：體積為100～150mL，具塞。
　　氣密性試驗：把1mL己烷放入瓶中，密塞后放入60℃熱水中30min，密封處無氣泡外漏。
　　4.8.3.2　氣相色譜儀：(帶氫火焰離子化檢測器)。
　　4.8.4　分析步驟
　　4.8.4.1　氣相色譜參考條件
　　4.8.4.1.1　色譜柱：不銹鋼柱，內徑3mm，長3m，內裝涂有5%DEGS的白色擔體102(60～80目)。
　　4.8.4.1.2　檢測器：氫火焰離子化檢測器。
　　4.8.4.1.3　柱溫：60℃。
　　4.8.4.1.4　汽化室溫度：140℃。
　　4.8.4.1.5　載氣(N2)：30mL/min。
　　4.8.4.1.6　氫氣：50mL/min。
　　4.8.4.1.7　空氣：500mL/min。
　　4.8.4.2　測定：稱取25.00g的食用油樣，密塞后于50℃恒溫箱中加熱30min，取出后立即用微量注射器或注射器吸取0.10～0.15mL液上氣體(與標準曲線進樣體積一致)注入氣相色譜，記錄單組分或多組分(用歸一化法)測量峰高或峰面積，與標準曲線比較，求出液上氣體六號溶劑的含量。
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　　4.8.4.3　標準曲線的繪制
　　取預先在氣相色譜儀上測試管六號溶劑量較低的油為曲線制備的體底油(或經(jīng)70℃開放式趕掉大部分殘留溶劑的食用油或壓榨油)，分別稱取25.00g放入6只氣化瓶中，密塞。通過塞子注入六號溶劑標準液(4.8.2.2)0、20、40、60、80、100μL(含量分別為0，0.02×X7……0.10×X7μg)。放入50℃烘箱中，平衡30min，分別取液上氣體注入色譜，各響應值扣除空白值后，繪制標準曲線(多個色譜峰用歸一化法計算)。
　　4.8.5　計算
　　
　　式中：X8——油樣中六號溶劑的含量，mg/kg；
　　m8——測定氣化瓶中六號溶劑的質量，μg；
　　m9——樣品質量，g。
　　結果的表述：報告算術平均值的三位有效數(shù)。
　　4.8.6　允許差
　　相對相差≤15%。
　　4.9　鎳(適用于人造奶油)
　　4.9.1　原理
　　樣品中的鎳用稀酸提取后，在強堿性溶液中以過硫酸銨為氧化劑，鎳與丁二酮肟形成紅褐色絡合物，與標準系列比較定量。
　　4.9.2　試劑
　　4.9.2.1　鹽酸(1＋23)：量取4mL鹽酸加水稀釋至96mL。
　　4.9.2.2　石油醚：沸程30～60℃。
　　4.9.2.3　檸檬酸鈉溶液(100g/L)。
　　4.9.2.4　酚紅指示液(1g/L)：稱取0.1g酚紅用乙醇(20%)溶解后稀釋至100mL。
　　4.9.2.5　氨水。
　　4.9.2.6　丁二酮肟(C4H3N2O2)－乙醇溶液(10g/L)。
　　4.9.2.7　三氯甲烷。
　　4.9.2.8　氨水(1＋10)。
　　4.9.2.9　酒石酸鉀鈉溶液(500g/L)。
　　4.9.2.10　氫氧化鈉溶液(100g/L)。
　　4.9.2.11　過硫酸銨溶液(60g/L)：臨用現(xiàn)配。
　　4.9.2.12　鎳標準溶液：準確稱取0.1000g鎳粉或0.4954g硝酸鎳〔Ni(NO3)2•6H2O〕溶于少量鹽酸(1＋23)，移入1000mL容量瓶中，并用鹽酸(1＋23)稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于100.0μg鎳。
　　4.9.2.13　鎳標準使用液：吸取1.0mL鎳標準溶液置于100mL容量瓶中，以鹽酸(1＋23)稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于1.0μg鎳。
　　4.9.3　儀器
　　所有玻璃儀器先用硝酸(1＋1)浸泡4h，再以水沖洗干凈。
　　4.9.3.1　電動振蕩器。
　　4.9.3.2　分光光度計。
　　4.9.4　分析步驟
　　4.9.4.1　樣品處理
　　稱取50.00g經(jīng)水浴上加熱融化的樣品，置于125mL具塞錐形瓶中，加30mL鹽酸(1＋23)，置80℃水浴中，加熱10min，趁熱置振蕩器上振蕩30min，再置水浴中待油層與水層分離后，倒入125mL分液漏斗中，靜置分層后，水層放入第二只分液漏斗中，油層再倒回原錐形瓶中，再加10mL鹽酸(1＋23)，置80℃水浴中，加熱5min，再振蕩10min，再置水浴中分層后，仍倒入第一只分液漏斗中，水層并入第二只分液漏斗中，棄去油層。
　　4.9.4.2　去脂
　　第二分液漏斗中樣品提取液冷卻后，加15mL石油醚，振蕩1min，分層后棄去石油醚。
　　4.9.4.3　提純
　　于提取液中加3滴酚紅指示液，5mL檸檬酸鈉溶液(100g/L)，滴加氨水，使溶液由紅變黃再變紅后，再滴加2～4滴，使溶液pH為8.5～10，再加2mL丁二酮肟－乙醇溶液(10g/L)，振搖1min后，用三氯甲烷提取3次，每次5mL，振搖2min，合并三氯甲烷，置于50mL分液漏斗中，加10mL1∶10氨水振搖1min，靜置分層后棄去氨水，將三氯甲烷分入另一分液漏斗中，用鹽酸(1＋23)提取2次，每次2.5mL，振搖2min，使三氯甲烷中的鎳轉入酸液中，棄去三氯甲烷，收集酸液于10mL具塞比色管中。
　　4.9.4.4　測定
　　吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL鎳標準使用液(相當0，0.5，1，2，3，4，5μg鎳)，分別置于10mL具塞比色管中，分別加鹽酸(1＋23)至5mL。
　　于樣品及標準管中分別依次加入0.5mL酒石酸鉀鈉溶液(500g/L)，1.5mL氫氧化鈉溶液(100g/L)，0.5mL過硫酸銨溶液(60g/L)，混勻，放置3min。再各加入0.2mL丁二酮肟乙醇溶液(10g/L)，加水至10mL，混勻。放置15min后，用3cm比色杯，以水調節(jié)零點，于波長470nm處測吸光度，繪制標準曲線比較。
　　4.9.4.5　計算
　　
　　式中：X9——樣品中鎳的含量，mg/kg；
　　m10——測定用樣品鎳的質量，μg；
　　m11——樣品質量，g。
　　結果的表述：報告算術平均值的二位有效數(shù)。
　　4.9.4.6　允許差
　　相對相差≤10%。
　　4.10　油中非食用油的鑒別
　　對常見的三類非食用油進行定性鑒別。
　　4.10.1　桐油
　　4.10.1.1　三氯化銻－三氯甲烷界面法：取油樣1mL移入試管中。沿試管壁加1mL三氯化銻－三氯甲烷溶液(10g/L)，使試管內溶液分成兩層，然后在水浴中加熱約10min如有桐油存在，則溶液兩層分界面上出現(xiàn)紫紅色至深咖啡色環(huán)。
　　4.10.1.2　亞硝酸法：適用于豆油、棉油等深色油中桐油的檢出，但不適用于梓油或芝麻油中桐油的檢出。取樣品5～10滴于試管中，加2mL石油醚，使油溶解，有沉淀物時，過濾一次，然后加入結晶亞硝酸鈉少許，并加入1mL硫酸(1＋1)搖勻，靜置，如有桐油存在，油液混濁，并有絮狀沉淀物，開始呈白色，放置后變黃色。
　　4.10.1.3　硫酸法：取樣品數(shù)滴，置白瓷板之上，加硫酸1～2滴，如有桐油存在，則出現(xiàn)深紅色并且凝成固體，顏色漸加深，最后成炭黑色。
　　4.10.2　礦物油
　　取1mL樣品，置于錐形瓶中，加入1mL氫氧化鉀溶液(600g/L)及25mL乙醇，接空氣冷凝管回流皂化約5min，皂化時應振搖使加熱均勻。皂化后加25mL沸水，搖勻，如渾濁或有油狀物析出，表示有不能皂化的礦物油存在。
　　4.10.3　大麻油
　　取樣品和對照大麻油各10μL，點樣于硅膠G薄層板，此薄層板厚0.25～0.3mm，105℃下活化半小時。油太粘稠則用5倍苯稀釋，再進行點樣，點樣量稍多一點約10～20μL。展開劑用苯，顯色劑為牢固藍鹽B溶液(1.5g/L)(臨用配制)。當斑點和對照顏色及比移值相當時表示有大麻油。
　　胡麻油、芝麻油和牢固藍鹽B也呈紅色，但在薄層板上比移值較小。
　　4.11　黃曲霉毒素
　　按GB/T 5009.22操作。
　　附加說明：
　　本標準由衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司提出。
　　　本標準由衛(wèi)生部委托技術歸口單位衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所負責解釋。